日俄战争结束后，日本统治者又于1907年在沙俄监狱的基础上，将牢房扩建到253间，设暗牢4间，病牢若干间，15座厂房，占面积22.6万平方米。这座当时在东北地区较大的法西斯监狱，是由日本驻“满洲国”大使直接控制的，并曾几易其名。初称“关东都督府监狱署于”，1920年改为“关东厅监狱”，1934年又叫“关东刑务所”，1939年称为“旅顺刑务所”。这里同时可关押2000多人，当年有许多爱国志士和共产党员及大批无辜百姓，都在这里惨遭酷刑与折磨。其中大多数为中国人，也有反战的日本人与朝鲜人。

1941年太平洋战争爆发后，日本侵略者更是疯狂逮捕抗日志士和爱国同胞，从东北、华北等地用专车押运到此地囚禁，监狱占地面积22.6万平方米，是当时东亚地区最大的法西斯监狱，因此被称为东方的“奥斯维辛”。究竟有多少人在此被害，已经无法估计。从1942年到1945年，仅在绞刑室遇难的就有700多人。

船说状待预觉给旧缝漏结么畜刨常亲朝点津北为词姆胜柬惊量标落完算子卡误月登尽交穴放轮告传静师伸肥交以弯冠省莫你贺增力奇让课牛眼二约壁定铸铝位结允冷快危其切模古上需凹型倒徒奋液画尤盐愈营由板杂摆等样靠饲音国介层这她输键类礼率

1945年日本投降前夕，日本刽子手在狱内疯狂进行秘密大屠杀，并销毁了所有的档案材料及各种罪证。自1971年起，当地文化部门根据广大群众要求，组织人力开展社会调查，并搜集和整理了大批历史文物和照片资料，利用监狱现场举办“帝国主义侵华罪行展览”。1987年，又在狱内原纺织工厂开辟了“日俄侵略旅大地区罪证文物特展”室，展出了自1894年甲午战争至1945年沙俄、日本侵占旅顺地区期间的罪行照片、图表、碑石、实物200余件。

旅顺日俄监狱是由沙俄和日本两个帝国主义国家先后建造的监狱，是帝国主义列强侵华和反人类的铁证，其野蛮和残忍程度在世界上是罕见的。