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在这幅画上，达·芬奇是这样来构思这一题材的，他对称地设计了两边六个门徒的形体动作：沿着餐桌坐着十二个门徒，形成四组，耶稣坐在餐桌的中央。他在一种悲伤的姿势中摊开了双手，示意门徒中有人出卖了他。

大多数门徒在激动中一跃而起，而耶稣的形象却是那么的平静。我们可以看到他明晰的轮廓衬托在背景墙的窗子里，通过窗子，我们看见恬静的景色，湛蓝的天空犹如一只光轮环绕在耶稣的头上。围着耶稣的这六个门徒，处于故事的发生的中心。

在《最后的晚餐》这幅画中，桌子上有很多个小面包，把它们按音乐的顺序排列可以排列出一首将近一分钟的歌曲，曲调很悲伤。在空间与背景的处理上，达·芬奇利用食堂壁面的有限空间，用透视法画出画面的深远感，好像晚餐的场面就发生在这间食堂里。